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鸡Apob基因组织表达与CRISPR/Cas9敲除系统的构建
鸡 Apob基因 CRISPR/Cas9 脂质代谢
2021/3/30
旨在探究Apob基因在鸡肝脂质代谢过程中的功能。本研究对鸡Apob蛋白进行理化性质分析；利用RT-qPCR检测Apob基因在4周龄黄羽肉鸡组织中的表达情况，每组设置3个重复，进行3次平行试验。根据鸡Apob蛋白关键结构域，在Apob基因外显子设计3对sgRNA，构建Cas/gRNA载体；将重组质粒转染DF-1细胞后，利用T7核酸内切酶I （T7 endonuclease I，T7EI）酶切法和TA...
CRISPR/Cas9介导RB1基因敲除及其在鸡前脂肪细胞分化、增殖中的功能研究
CRISPR/Cas9 RB1 鸡 脂肪沉积 分化 增殖
2016/10/31
旨在研究RB1基因在鸡前脂肪细胞分化和增殖过程中的功能，本研究利用CRISPR/Cas9系统在鸡前脂肪细胞中敲除RB1基因，检测鸡前脂肪细胞的分化和增殖能力及相关标志基因的表达水平。结果表明，CRISPR/Cas9系统能够有效介导RB1基因的敲除并引起RB1基因翻译的提前终止，敲除效率可以达到10%。油红O提取比色和CCK-8的结果显示，敲除RB1基因后，鸡前脂肪细胞的分化能力减弱、增殖能力增强；...
CRISPR/Cas9技术的应用性研究
CRISPR/Cas9 遗传操作 基因敲除 基因反转 基因重复
2016/7/26
旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用，本研究通过在小鼠遗传操作（Genetic manipulation）中使用该技术，创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段，结果发现，针对DCX基因进行编辑，再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型，说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达；其次，该技术还成功应用于Pcdhα基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的...
旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统，并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体；随后人工设计同源修复供体基因序列，并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中，构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系；将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中，PCR鉴定筛选到...
CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除
CRISPR/Cas 基因敲除 鸡
2016/6/22
本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系，实现目的基因定点敲除，为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP (chr2，Expression In PGC) 基因全长，并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3，并构建cas9/gRNA载体；将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1，利用Lucifera...
利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究
CRISPR-Cas9系统 基因组编辑 突变率
2016/1/26
为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育，本研究将带有绿色荧光蛋白（GFP）和肌肉生长抑制素基因（Myostatin，MSTN）靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系，利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞，使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况，以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果。结...
CRISPR/Cas9系统介导基因组编辑的研究进展
人工核酸内切酶 基因编辑 基因打靶 CRISPR/Cas9 RNA指导的核酸内切酶
2014/12/25
由规律成簇间隔短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）以及CRISPR相关蛋白9（CRISPR-associated protein 9，Cas9），即CRISPR/Cas9系统改造的第3代人工核酸内切酶，与锌指核酸内切酶(Zinc finger endonuclease，ZFN)以及类转录激...